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尼氏染色法操作步驟及注意事項
點擊次數:5674 發布時間:2016-07-27
尼氏染色法主要特點:操作簡便染色穩定、分化時間短,適用范圍廣,可以用于石蠟組織切片的尼氏物質/尼氏小體、神經元等。
 
尼氏染色法操作步驟:
1.固定:可采用乙醇、Carnoy固定液或中性福爾馬林溶液。
2.組織切片:石蠟切片7~10μm或25μm(見注意事項4)。
3.切片脫蠟入水。
4.用甲基紫染色液涂片,染色10~20min。
5.蒸餾水沖洗。
6.用NisslDifferentiation分化4~8s,直到大部分染色被消除。
7.直接經無水乙醇至二甲苯,顯微鏡下觀察。
8.如果有必要,重復步驟6和7。重復時,給予少量NissolDifferentiation分化。
9.在二甲苯中充分沖洗。加拿大香脂或DPX封片。
 
尼氏染色法注意事項:
1.尼氏體離體后容易溶解,所以組織取出后應立即固定,否則難以著色。
2.組織固定起著非常重要的作用,固定可采用乙醇、Carnoy固定液或中性福爾馬林溶液。
3.本染色液對石蠟組織切片的尼氏染色效果較好。
4.如果要證實尼氏物質的存在,那么染色后必須要用NissolDifferentiation分化。
5.石蠟切片厚度7~10μm或25μm(皮質神經元密度的評估要用25μm厚的切片)。
6.染色后的標本務必避光保存,否則容易褪色。
7.主要由甲基紫染色液、分化液等組成。尼氏物質呈紫黑藍色,神經元呈淡紫藍色,細胞核呈紫藍色。
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